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　　堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)試劑盒標(biāo)本的采集與保存

　　1. 血清：

　　將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　2. 血漿：

　　用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　3. 組織勻漿：

　　1) 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);

　　2) 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。

　　3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測(cè)。

　　4. 細(xì)胞裂解液：

　　1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);

　　2)將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3 次;

　　3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融)：

　　i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。

　　ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。

　　4)將標(biāo)本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。

　　5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：

　　請(qǐng) 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　注意：

　　1. 以上標(biāo)本均需密封保存，4oC保存應(yīng)小于1周，-20oC不應(yīng)超過1個(gè)月，-80oC不應(yīng)超過2個(gè)月。

　　2. 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

　　3. 實(shí)驗(yàn)前紅細(xì)胞裂解液必須用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋。

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